文献类型： 中文期刊

作者： 田书苗 ¹ ; 郅玉宝 ² ; 王林建 ³ ; 乔松林 ⁴ ; 郭军庆 ⁵ ;

作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院河南省水产科学院

2.河南省农作物新品种重点实验室

3.河南科技大学动物科技学院河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南农业大学生物工程学院

4.河南省动物免疫学重点实验室

5.浙江大学动物预防医学研究所

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;纯化;Sepharose 4FF层析

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2016 年 05 期

页码： 568-572

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用差速离心、膜包超滤浓缩和Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶层析相结合的策略纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),建立了一种温和纯化PRRSV的方法。通过SDS-PAGE、Western-blot和检测病毒含量、蛋白含量等方法分析纯化效果。用纯化后的病毒免疫BALB/c雌性小鼠,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测其免疫原性,并与超速离心沉淀病毒的纯化方法相比较,评估纯化病毒的免疫效果。结果显示,4FF纯化后的病毒TCID_(50)提高了50倍,与超离方法相比,4FF纯化法将病毒原液杂蛋白的去除比率由97.51%提高到99.68%,SDS-PAGE显示未见明显杂蛋白条带,IPMA结果显示4FF纯化病毒的免疫原性较好,特异性较强,消除了免疫后小鼠血清与Marc-145细胞蛋白的非特异性反应。结果表明,4FF纯化方法优于超离纯化方法,前者的建立为制备单克隆抗体和规模化纯化PRRSV疫苗的工艺开发奠定基础。