文献类型： 中文期刊

作者： 王瑞宁 ¹ ; 王勋 ² ; 李鸽 ³ ; 李青梅 ⁴ ; 李存法 ¹ ; 杨苏珍 ⁴ ; 郭军庆 ⁴ ;

作者机构： 1.河南牧业经济学院动物医药学院

2.洛阳职业技术学院食品与药品学院

3.西北农林科技大学动物医学院

4.河南省农业科学院动物疫病防控研究所

关键词： 猪伪狂犬病病毒;gE蛋白;单克隆抗体;间接免疫荧光试验

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2024 年 53 卷 012 期

页码： 167-173

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了开发检测猪伪狂犬病病毒（PRV）的免疫诊断试剂，使用HEK293F细胞表达的gE重组蛋白免疫BALB/c小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）方法筛选阳性杂交瘤细胞株，以期获得对PRV反应性良好的抗gE重组蛋白单克隆抗体。结果显示，获得2株（2B5和8F7）稳定分泌抗PRV gE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其腹水单克隆抗体的ELISA效价均为1∶1 000000；单克隆抗体亚型鉴定结果表明，2株单克隆抗体的重链均为IgG1亚型，轻链均为Kappa链。单克隆抗体特异性测定结果显示，2株单克隆抗体仅与PRV反应，不与其他常见病毒发生反应；SDS-PAGE结果显示，纯化后的单克隆抗体均在约50 ku和25 ku处有纯度较高的特异性条带；间接免疫荧光试验（IFA）结果表明，制备的2株单克隆抗体与转染gE质粒的293T细胞发生特异性反应。根据Western blot结果，筛选获得的2株单克隆抗体均在120 ku附近出现特异条带，表明这2株单克隆抗体均能特异性识别PRV。综上，成功制备了2株特异性强、效价高的抗gE蛋白单克隆抗体，为后期PRV诊断试剂盒的制备提供重要的生物材料。