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转bFat-1基因载体及牛胚胎成纤维转基因细胞系构建

文献类型： 中文期刊

作者： 张立春 1 ; 金海国 2 ; 刘铮 1 ; 郭振刚 3 ; 曹阳 1 ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院畜牧分院

2.延边大学农学院

3.吉林省农业科学院畜牧分院延边大学农学院吉林农业大学动物科技学院

关键词： bFat-1基因;载体构建;牛胚胎成纤维细胞;转基因细胞系

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2013 年 21 期

页码： 15-18+195

收录情况： 北大核心

摘要： 为了获取转bFat-1基因牛胎儿成纤维细胞系,试验采用酶切连接方法构建pIRES2-eGFP-bFat-1载体,采用脂质体转染、G418筛选、荧光显微镜观察、基因组PCR和RT-PCR鉴定方法构建重组转bFat-1基因牛胚胎成纤维细胞。结果表明:SacⅠ和ApaⅠ双酶切和测序验证pIRES2-eGFP-bFat-1载体构建正确;经脂质体转染,G418筛选去除未转染细胞,最后通过荧光显微镜观察,基因组PCR和RT-PCR鉴定获得了4株既高表达绿色荧光蛋白又高表达bFat-1基因的牛胚胎成纤维转基因细胞株。说明已成功构建了转bFat-1基因载体并构建出转基因细胞系。

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