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羊粪沼液微生物总DNA提取方法优化比较研究

文献类型： 中文期刊

作者： 陈竞 1 ; 苏艳 1 ; 冯蕾 2 ; 杨新平 2 ; 秦新政 2 ; 古丽·艾合买提 1 ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学学院

2.新疆农业科学院微生物应用研究所

关键词： 沼液;总DNA提取;优化;PCR-DGGE检测

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2013 年 50 卷 12 期

页码： 2280-2285

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】目前沼液污泥中99%的微生物不可培养的,为开展羊粪沼液中微生物多样性的研究,须对沼液总DNA进行提取。【方法】研究以总DNA及其PCR产物的琼脂糖电泳结果为判定依据,以SDS结合酚氯仿抽提总DNA的方法为基础,采用逐步增加净化菌泥、溶菌酶裂解以及DNA纯化等优化方法,并测定优化效果。【结果】后续增加的步骤对提高总DNA的提取效率及质量十分有效,所得DNA在得率、大小以及纯净度方面都有所提高,可以满足后续分子实验的要求。【结论】以SDS法为基础,用TENP和PBS洗涤菌泥,添加适量溶菌酶,并适当延长反应时间至3 h,再经纯化柱吸附和洗脱的方法可以获得更高质量的羊粪沼液总DNA。

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