文献类型： 中文期刊

作者： 马静 ¹ ; 姚大为 ¹ ; 杨春蕾 ¹ ; 李秋玲 ¹ ; 王添祯 ¹ ; 陈成彬 ¹ ; 宋文芹 ¹ ; 马毅 ¹ ;

作者机构： 1.南开大学生命科学学院;天津市畜牧兽医研究所奶牛技术产业创新团队;廊坊师范学院生命科学学院

关键词： 奶山羊;乳腺上皮细胞;CREB;RNA干扰;脂质合成;甘油三酯

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2019 年 12 期

页码： 2413-2421

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在筛选奶山羊cAMP应答元件结合蛋白CREB(cAMP response element binding protein)基因的siRNA,揭示干扰该基因后对乳腺上皮细胞中乳脂合成相关基因表达及甘油三酯合成的影响。本研究通过qRT-PCR方法从西农萨能奶山羊乳腺组织中扩增CREB基因完整的CDS区,进行序列分析和不同泌乳时期表达水平分析,合成靶向CREB基因的siRNA,利用荧光定量PCR筛选有效siRNA,并检测脂质合成相关基因的表达,采用试剂盒检测细胞内甘油三酯含量。结果表明:1)克隆得到全长为984 bp的奶山羊CREB基因的CDS区(GenBank登录号:MK158073),并对其进行生物信息学分析。2)该基因在奶山羊泌乳盛期乳腺组织的表达量为干奶期的1.93倍(P<0.05)。3)成功筛选到靶向CREB基因的有效siRNA,干扰效率为72%(P<0.01);并将其在奶山羊乳腺上皮细胞进行转染,通过qRT-PCR检测脂质合成相关基因的表达,与对照组相比,干扰CREB基因后显著抑制了FASN、ACACA、SCD1、FABP3、LPL、CPT1B、GPAM和DGAT2基因表达量(P<0.05),并显著增加了HSL基因表达量(P<0.05);且细胞内甘油三酯含量被显著下调(P<0.05)。综上所述,CREB基因在奶山羊原代乳腺上皮细胞中很可能通过调控脂质代谢相关基因的表达及甘油三酯含量对山羊的乳脂合成过程发挥重要作用。