文献类型： 中文期刊

作者： 刘博 ¹ ; 张倩 ¹ ; 莫玲 ¹ ; 林盼盼 ¹ ; 谷英华 ¹ ; 刘海隆 ¹ ; 蔡青云 ¹ ; 张艳 ¹ ; 王文秀 ¹ ;

作者机构： 1.山东省滨州畜牧兽医研究院;山东省院士工作站;山东绿都生物科技有限公司;滨州市沾化区科技创新发展研究中心;滨州市滨城区农业农村综合服务中心;海南省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： NLRP3基因;实时荧光定量PCR;猪肺炎支原体

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2023 年 44 卷 009 期

页码： 19-23

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据NCBI NLRP3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物,构建标准品质粒pMD18T-NLRP3-189.通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验,成功建立了 NLRP3的SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法,用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染后的猪肺组织中NLRP3表达水平.最佳引物浓度为0.15 μmol/L,建立的标准曲线方程为y=-3.5196x+36.968,E值为0.96,最低检测量为84个拷贝,熔解曲线有单一峰,批内变异系数CV为0.067%~0.184%,批间变异系数为0.221%~0.594%,重复性好.该方法检测仔猪在感染Mhp后肺组织中的NLRP3 mRNA表达水平,感染组与健康组相比差异显著(P<0.01),NLRP3表达水平明显增高,在感染后14 d可达到高峰,平均mR-NA拷贝数达18 000左右,可持续42 d.表明该检测方法稳定性良好,精确度高,特异性强,为进一步研究猪炎症小体NLRP3的激活及其相关炎症反应机制提供了技术支持.