文献类型： 中文期刊

作者： 林婧楠 ¹ ; 赵景壮 ² ; 徐黎明 ² ; 刘淼 ² ; 任广明 ² ; 卢彤岩 ² ;

作者机构： 1.上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心

2.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

关键词： 鲤春病毒血症病毒;糖蛋白;抗血清制备;细胞免疫荧光

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2019 年 49 卷 005 期

页码： 44-50

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)shlj1分离株基因组RNA为模板,利用RT-PCR扩增获得SVCV糖蛋白(Glycoprotein,G)部分基因序列(420 bp),克隆至pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-G;将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta表达菌株,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)对截短G蛋白的表达及纯化情况进行检测;将纯化的G蛋白免疫小鼠制备鼠抗血清,采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞间接免疫荧光抗体试验(Indirect fluorescent antibody test,IFAT)对抗血清进行鉴定.SDS-PAGE结果显示该重组截短G蛋白与预期大小相符(约为35 kDa),以包涵体的形式表达;ELISA结果显示,制备的鼠抗截短G蛋白血清效价为1:80000;IFAT结果显示,抗血清能够识别不同地区的SVCV分离株(黑龙江省3株,辽宁省2株),在FITC标记的羊抗鼠IgG作用下,呈特异性绿色荧光.结果表明,制备的截短SVCV G蛋白具有良好的免疫原性,利用其所制备的抗体能够识别我国不同SVCV分离株病毒表面天然结构的糖蛋白.