文献类型： 中文期刊

作者： 陈建武 ¹ ; 任红艳 ² ; 华文君 ² ; 刘西梅 ² ; 綦世金 ² ; 周黎 ² ; 欧阳艳 ³ ; 毕延震 ² ; 杨烨 ¹ ;

作者机构： 1.长江大学动物科学学院

2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

3.湖北三峡职业技术学院农学院

关键词： 基因打靶;CRISPR/Cas9;同源重组;肌抑素

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2017 年 37 卷 01 期

页码： 58-63

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 同源重组介导的基因打靶技术因其准确性高、引入的突变可以预测,已经成为功能基因组研究的重要工具。但是在真核生物体内,天然同源重组的概率极低,对后续的筛选和鉴别造成很大困扰。因此,建立一个广谱性的高效筛选策略极为重要。研究基于"双荧光"的可视化筛选,通过提高筛选效率,从而建立了一种显著提高同源重组打靶效率的新策略。该策略以绿色荧光蛋白基因和新霉素基因为正筛选标记,以红色荧光蛋白基因为负筛选标记。经过G418筛选后,挑取仅表达绿色荧光蛋白的抗性克隆,用于跨界PCR检测。研究尝试运用上述新策略,借助CRISPR/Cas9技术,对猪肌抑素基因进行同源重组介导的基因打靶。在选取的T1和T2两个靶位点处,"双荧光"策略筛选的细胞阳性率分别达到80.5%和86.7%,筛选效率得到显著提高。研究建立的"双荧光"可视化筛选策略具有高效性和广谱性,在动物基因编辑领域具有广阔的应用前景。