文献类型： 中文期刊

作者： 黄镜浩 ¹ ; 林雄杰 ¹ ; 陈木兰 ² ; 饶文华 ³ ; 和静怡 ⁴ ; 高芳銮 ⁴ ; 范国成 ³ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院果树研究所/福建省植物营养与肥料重点实验室

2.三明市农业农村局

3.福建省农业科学院果树研究所

4.福建农林大学植物保护学院

关键词： 柑橘;硼毒害;cDNA三框文库;启动子;调控因子

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2025 年 40 卷 003 期

页码： 225-233

摘要： 【目的】以柑橘硼毒害响应关键基因MIR397为切入点筛选上游调控因子，以期为柑橘响应硼毒害的分子网络研究和定向品种改良提供理论参考。【方法】以雪柑（Citrus sinensis）和酸柚（C. grandis）为材料，采用SMART技术构建硼毒害处理叶片的均一化酵母单杂交三框cDNA文库，以硼毒害响应关键基因MIR397启动子中的脱落酸响应元件（Abscisic Acid Response Element, ABRE）、胚乳发育元件（General Control Non-repressed Protein 4,GCN4）、 BoxII-like元件（BoxII-likeCis-actingElement,BoxII-like）和乙烯响应元件（EthyleneResponseElement,ERE）为诱饵筛选上游的调控因子。【结果】所建三框文库容量分别为1.5×106、1.5×106、1.6×106 CFU，外源基因插入片段长度为500～4 000 bp，重组率为100%，初级文库96克隆测序冗余率为0%;cDNA三框表达文库滴度4×109 CFU·mL-1，满足酵母单杂交cDNA文库构建要求。单杂交文库筛选结果获得23条表达序列标签（expressed sequence tag, EST），其中ABRE元件11条、GCN4元件3条、ERE元件9条；60.87%的EST序列与植物的生长发育、逆境响应、信号转导及转录调控相关，17.39%的EST与蛋白质翻译相关，其余被注释的EST为蛋白酶。Y1H点对点验证HAP3、BBX和EIN3与ERE元件存在互作。【结论】本研究通过酵母单杂交文库筛选得到3个与硼毒害响应关键基因MIR397启动子ERE元件存在互作的转录因子，为进一步研究柑橘响应硼毒害的分子网络奠定基础。