文献类型： 中文期刊
作者： 滕蔓 1 ; 迟佳琦 2 ; 柴书军 1 ; 罗俊 1 ;
作者机构： 1.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室
2.北京中医药大学东方医院
关键词： 鸡;LTBP1;原核表达;单克隆抗体;间接免疫荧光试验;蛋白免疫印迹试验
期刊名称： 河南农业科学
ISSN： 1004-3268
年卷期： 2020 年 49 卷 012 期
页码： 144-150
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了研究鸡潜在转化生长因子结合蛋白(LTBP1)功能,构建原核表达重组质粒pET-30a-LTBP1,转化E.coli BL21感受态细胞并经IPTG诱导进行表达.对以包涵体形式表达的LTBP1蛋白进行变复性和亲和层析纯化,然后免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术建立单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备抗鸡LTBP1的单克隆抗体.通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选,获得了2株杂交瘤细胞株3C11-A9和2B1-G7.以效价较高的3C11-A9制备单克隆抗体腹水,间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)试验结果均表明,单克隆抗体3C11-A9可特异性识别鸡源细胞CEF和DF-1表达的LTBP1蛋白,同时IFA结果还显示,3C11-A9单克隆抗体腹水可与包括人、猴、猪和鼠在内的8种常见哺乳动物细胞发生特异性染色.综上,成功制备了抗鸡LTBP1单克隆抗体,且具有多物种广谱识别特性.
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