文献类型： 中文期刊

作者： 张志会 ¹ ; 滕蔓 ¹ ; 刘金玲 ¹ ; 郑鹿平 ¹ ; 王伟东 ¹ ; 张文凯 ¹ ; 张多 ¹ ; 李林燕 ¹ ; 张卓 ¹ ; 柴书军 ¹ ; 樊剑鸣 ² ; 罗俊 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物疫病防控研究所中英禽病国际研究中心

2.郑州大学公共卫生学院

关键词： 鸡;马立克病病毒;meq基因;CRISPR/Cas9;基因编辑;致病性

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2024 年 56 卷 010 期

页码： 71-79

收录情况： 北大核心

摘要： 马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病，严重危害世界养禽业。随着MDV持续进化及毒力增强，急需研发新型高效的MD疫苗以加强该病的有效防控。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，以MDV变异株HN302为亲本毒株，成功构建了meq基因缺失的毒株HN302Δmeq,经过PCR扩增鉴定及测序分析，证实meq基因缺失且传代稳定。间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析均证实HN302Δmeq感染鸡胚成纤维细胞(CEF)中无meq基因表达，并且meq基因的缺失不影响其他病毒基因的表达。利用RT-qPCR分析HN302Δmeq在CEF中的体外增殖曲线，结果显示meq基因的缺失不影响MDV体外复制。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示，与亲本毒株HN302相比，HN302Δmeq对宿主无致病性，其诱导的MD发病率、死亡率和肿瘤发生率均为0,且未观察到明显的免疫器官萎缩。上述数据表明，HN302Δmeq的毒力明显丧失，具备继续作为疫苗候选株开展相关研究的可能性。本研究成功构建了MDV变异株HN302的meq基因缺失毒株，为后续MDV的致病机制及新型疫苗研究奠定了基础。