文献类型： 中文期刊
作者： 柯浩 1 ; 刘振兴 1 ; 林敏 1 ; 孟轩 1 ; 陈棠堂 2 ;
作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所
2.中山市海洋与渔业局
关键词： 锦鲤疱疹病毒;囊膜蛋白;B细胞表位;原核表达
期刊名称： 南方水产
ISSN： 1673-2227
年卷期： 2010 年 06 卷 04 期
页码： 58-64
摘要： 从感染锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的锦鲤(Cyprinus carpiokoi)肾脏组织中提取DNA,通过PCR扩增了KHVORF59基因。该基因全长411bp,所编码的蛋白包含136个氨基酸,分子量14.3kDa,等电点(PI)6.91,有12个潜在的O糖基化位点。此研究克隆的KHVORF59基因第130位碱基由G突变为A,使其编码的第44位氨基酸由Ala突变为Thr。采用DNAStar程序,在综合分析二级结构柔性区、蛋白的亲水性、表面可能性和抗原性指数的基础上,预测了KHVORF59蛋白主要B细胞表位,并将其区段的编码序列与KHVORF59完整编码序列分别克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET32a-ORF59S和pET32a-ORF59C,转入大肠杆菌Rosetta菌株,IPTG诱导表达。SDS-PAGE及WesternBlot分析显示,pET32a-ORF59S可以高效表达,表达的截短KHVORF59蛋白主要以可溶性形式存在,采用HisBindResin填料,层析纯化了该截短蛋白。
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