文献类型： 中文期刊

作者： 李彬 ¹ ; 杜露平 ² ; 何孔旺 ² ; 温立斌 ² ; 茅爱华 ² ; 张雪寒 ² ; 倪艳秀 ² ; 郭容利 ² ; 王小敏 ² ; 周俊明 ² ; 吕立新 ² ; 俞正玉 ² ; 胡屹屹 ² ; 于洋 ² ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所

2.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 猪博卡病毒;VP2基因;克隆;原核表达

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2013 年 29 卷 04 期

页码： 796-799

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究猪博卡病毒VP2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达。根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的VP2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a-VP2,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为49 000的融合蛋白,蛋白质表达量较高,且以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western blot结果显示,表达的VP2蛋白能与His抗体发生特异性免疫反应。说明该试验成功克隆了猪博卡病毒的VP2基因并进行了原核表达,为研究该蛋白的功能及建立血清学诊断方法奠定了基础。