文献类型： 中文期刊
作者： 姜坤 1 ; 黄健 1 ; 张峥 1 ; 成君军 1 ; 石正丽 1 ;
作者机构： 1.青岛农业大学动物科技学院中国水产科学研究院黄海水产研究所中国科学院武汉病毒研究所
关键词： WSSV;vp28;细胞转染;293T细胞
期刊名称： 安徽农业科学
ISSN： 0517-6611
年卷期： 2010 年 38 卷 22 期
页码： 11732-11734
收录情况： 北大核心
摘要： [目的]为研究对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白与虾细胞之间的作用机制奠定基础。[方法]采用PCR扩增方法构建含白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28的真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-vp28,用磷酸钙共沉淀法将重组质粒转染到293T细胞中,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。[结果]VP28的PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中呈现出1条634bp左右的条带,与GenBank中vp28的序列完全一致。对pcDNA3.1(+)-vp28转染后的阳性单克隆菌落进行PCR鉴定、扩大培养和质粒提取,并对所得质粒进行HindⅢ和BamⅢ双酶切,获得了5409和610bp左右的2条带,与预期结果一致;所获扩增产物与vp28序列完全一致,说明重组质粒pcDNA3.1(+)-vp28被成功转染到293T细胞中;SDS-PAGE和Westernblot检测结果显示,pcDNA3.1(+)-vp28在293T细胞中的表达产物与预期结果相符。[结论]pcDNA3.1(+)-vp28在293T细胞中可成功表达VP28。
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