文献类型： 中文期刊

作者： 杨耀武 ¹ ; 齐香荣 ² ; 陈德胜 ² ; 何孔旺 ² ; 陈溥言 ² ; 沈国顺 ² ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室

2.南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室,南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室,南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室,江苏省农业科学院畜牧兽医研究所,南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室,沈阳农业大学畜牧兽医学院动物医学系 南京210095,沈阳农业大学畜牧兽医学院动物医学系,南京210095,南京210095,南京210095

关键词： 流行性乙型脑炎病毒;E蛋白基因;反转录-聚合酶链反应;克隆;表达;抗原性

期刊名称： 中国人兽共患病杂志

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2003 年 19 卷 05 期

页码： 31-35

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并将其克隆入 pET - 32a(+)表达载体中 ,构建重组融合表达载体pET -E ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,利用IPTG诱导获得高效表达。结果　扩增的E蛋白基因片段长 1113bp ,编码 371个氨基酸残基 ,该基因片段与国内发表的减毒株SA14 - 14 - 2碱基序列同源性为 10 0 %。表达产物分子量约为 6 2kD ,经Westernblotting分析表明表达产物具有较好的抗原性。结论　通过序列分析表明 ,我国的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株未发生基因突变。表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据。