文献类型： 中文期刊
作者： 张丹 1 ; 温立斌 2 ; 何孔旺 2 ; 范红结 2 ;
作者机构： 1.南京农业大学动物医学院
2.南京农业大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所
关键词： 类猪圆环病毒ORF1;pc DNA3.1(+)载体;RT-PCR;免疫组化
期刊名称： 云南农业大学学报(自然科学)
ISSN： 1004-390X
年卷期： 2016 年 03 期
页码： 416-420
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为研究类猪圆环病毒P1-ORF1能否在真核细胞中表达,本文通过PCR技术扩增P1-ORF1基因,利用pc DNA3.1(+)载体构建重组质粒pc DNA3.1(+)-ORF1,通过lipofectamine 2000脂质体介导转染PK-15细胞以表达P1-ORF1基因,再通过RT-PCR及免疫组织化学技术从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达。结果显示:从转染的细胞中提取总RNA,经Recombinant DNase I处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出359 bp的目的片段;免疫组化分析显示:pc DNA3.1(+)-ORF1重组质粒样品能够与抗P1-ORF1多克隆抗体发生特异性反应。研究结果表明类猪圆环病毒P1-ORF1真核表达质粒pc DNA3.1(+)-ORF1构建成功,为进一步研究P1-ORF1蛋白的免疫学特性奠定基础。
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