文献类型： 中文期刊
作者： 蒋智勇 1 ; 宋长绪 1 ; 高向阳 2 ; 王贵平 1 ; 赵亚华 2 ;
作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所
2.华南农业大学生命科学学院
关键词： 猪2型圆环病毒;ORF1基因;克隆;表达
期刊名称： 中国兽医科技
ISSN： 1000-6419
年卷期： 2004 年 34 卷 05 期
页码：
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据GenBank中猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )的ORF1基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,对PCV 2广东株 (GD)ORF1基因进行PCR扩增 ,将扩增的ORF1基因克隆入 pMD 18 T载体 ,获得的重组质粒命名为 pMD ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原核表达载体pBAD/ gⅢC得到重组子 ,命名为 pBAD/ gⅢ ORF1。序列分析表明 ,克隆的ORF1与德国分离株AF2 0 1897核苷酸序列的同源性高达 99.5 % ;与其他PCV 2株的核苷酸序列同源性为 92 .1%～99.9% ,推导的氨基酸序列同源性为 90 .2 %～ 99.5 %。同时 ,测序结果表明 ,克隆的ORF1准确插入了 pBAD/ gⅢC的多克隆位点 ,未改变读码框。用L 阿拉伯糖诱导表达 ,收集菌液进行SDS PAGE和Western blotting分析 ,结果表明PCV 2ORF1在pBAD/ gⅢC中获得了高效融合表达 ,其表达蛋白的分子质量约为 4 1ku。
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