文献类型： 中文期刊

作者： 姚静静 ¹ ; 胡骁飞 ² ; 韩俊岭 ³ ; 李青梅 ⁴ ; 王方雨 ⁵ ;

作者机构： 1.河南科技大学食品与生物工程学院/畜禽疫病诊断与食品安全检测河南省工程实验室河南省农业科学院/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室

2.河南农业大学牧医工程学院

3.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室新乡医学院第一附属医院

4.河南省农业科学院生物技术研究所

5.河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室

关键词： 伏马菌素B1;单克隆抗体;杂交瘤;ELISA

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2016 年 47 卷 05 期

页码： 1009-1017

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B_1(FB_1)单克隆抗体,并初步应用于FB_1的检测,以期为FB_1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB_1-BSA和FB_1-OVA。以免疫原FB_1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次。四免后,小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,采用ELISA筛选,建立分泌抗FB_1抗体的单克隆杂交瘤细胞株;采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB_1单抗,并鉴定单抗的各种性能;初步建立FB_1免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB_1单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3,该细胞株分泌的mAbs的效价高达1∶1.02×10~6,亲和力常数平均值为7.98×10~(10) L·mol~(-1),亚型为IgG_3。FB_1mAbs的工作浓度为1∶6.0×10~4,与FB_1发生特异性反应,间接竞争ELISA测得IC_(50)=43.65ng·mL~(-1);与FB_1结构类似物FB_2和FB_3的交叉反应率分别为385%和72.4%,与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA均无交叉反应。样品回收率在85.85%~114.07%,平均值为98.81%;变异系数为10.11%。本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB_1单抗,并初步建立FB_1免疫学检测方法。