文献类型： 中文期刊

作者： 但现龙 ¹ ; 刘斌 ¹ ; 李小玲 ¹ ; 张利达 ¹ ; 施春雷 ¹ ; 周敏 ¹ ; 史贤明 ¹ ;

作者机构： 1.上海交通大学农业与生物学院陆伯勋食品安全研究中心中美食品安全联合研究中心

关键词： 沙门氏菌;靶点筛选;EvaGreen荧光定量PCR;扩增内标

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2011 年 51 卷 08 期

页码： 1119-1127

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立添加有扩增内标(IAC,Internal amplification control)的沙门氏菌EvaGreen荧光定量PCR检测体系,提高PCR检测可靠性。【方法】通过比较已有沙门氏菌属细菌的基因组序列,筛选沙门氏菌属特异检测靶点,设计特异引物;再用复合引物法构建扩增内标,优化参数,建立沙门氏菌内标PCR检测体系,利用特异性和灵敏度实验评价体系的检测性能。【结果】筛选得到的新特异靶点基因编码III型分泌系统蛋白(ssaQ)。针对该基因设计特异引物(SsaQ6),建立了添加有扩增内标的常规PCR和EvaGreen荧光定量PCR检测体系;二者对151株沙门氏菌和34株非沙门氏菌的检测符合率均达100%,对基因组DNA的检测下限达14.9拷贝/PCR和2.76拷贝/PCR;人工污染牛奶样品(初始染菌量:4-6 cfu/10 mL),増菌10 h和8 h后分别可检出沙门氏菌。【结论】本研究发掘的新靶点基因ssaQ特异性强,基于这一新靶点建立的添加有扩增内标的EvaGreen荧光定量PCR比常规内标PCR的检测限更低,重复性更好,快速方便,在12 h内即可得出检测结果,并且定量准确,有利于推进沙门氏菌PCR检测方法的标准化应用。