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高羊茅叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测

文献类型： 中文期刊

作者： 赵彤 1 ; 于荣 2 ; 黄丛林 1 ; 王永勤 1 ; 张秀海 1 ; 吴忠义 1 ;

作者机构： 1.北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心

2.首都师范大学生命科学学院

关键词： 高羊茅;叶绿体表达载体;定点整合;重叠延伸PCR法;瞬时表达;GFP荧光

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 23 卷 03 期

页码： 1116-1122

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】验证高羊茅叶绿体表达载体在高羊茅叶绿体中的瞬时表达情况,为今后在高羊茅叶绿体中稳定表达该载体,获得耐旱高羊茅的叶绿体转基因株系奠定基础。【方法】首先从高羊茅草叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段。然后将耐旱相关基因酵母海藻糖合酶基因tps1与水稻叶绿体16SrRNA基因的强启动子Prrn、烟草叶绿体基因psbA的终止子构建表达盒(Prrn-tps1-TpsbA-ter),连同草丁膦抗性基因bar表达盒、卡那霉素抗性基因nptII和绿色荧光蛋白基因gfp构建的融和基因表达盒一起克隆到定点整合同源片段之间,构建高羊茅叶绿体的稳定表达载体gTKGB。通过基因枪轰击法将gTKGB转化到高羊茅幼嫩叶片中,用激光共聚焦扫描显微镜对GFP的表达情况进行检测分析。【结果】克隆的高羊茅叶绿体基因16S-trnI-trnA-23S在NCBI登录号为:DQ490947-DQ490950。构建的叶绿体表达载体gTKGB转化高羊茅幼嫩叶片,在叶绿体中有很好的GFP表达。【结论】高羊茅叶绿体表达载体gTKGB可用于高羊茅叶绿体转化。

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