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几种海洋微藻基因组DNA的分离提取及PCR检测

文献类型： 中文期刊

作者： 张桂和 1 ; 徐碧玉 2 ; 王珺 1 ;

作者机构： 1.海南大学海洋学院

2.中国热带农业科学院热带生物技术国家重点实验室

关键词： 海洋微藻;DNA提取;CTAB;酶切;PCR检测

期刊名称： 热带海洋学报

ISSN： 1009-5470

年卷期： 2007 年 26 卷 01 期

页码： 70-74

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 用改良CTAB法分别提取6种海洋微藻的基因组DNA,发现提取的DNA纯度、产率高(>100μg.g-1鲜重),DNA完整性好。以6种海洋微藻的基因组DNA为模板,并以5'TTCGAGCCAG3'(OPC-01)为随机引物,对PCR反应条件进行研究。结果表明,25μl反应体系中,Mg2+、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0mmol.L-1、1.6U、20pmol.L-1、50ng和2.5mmol.L-1。扩增程序优化为:94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,循环45次,最后于72℃再延伸10min。酶切实验结果表明,6种海洋微藻的基因组DNA都能被EcoRⅠ酶切,酶切图谱呈弥散状,满足分子水平操作的要求,可直接应用于进一步的分子生物学实验。

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