文献类型： 中文期刊

作者： 赵微 ¹ ; 张东超 ¹ ; 陈婷 ¹ ; 何敬文 ¹ ; 扈立伟 ¹ ; 任君 ¹ ; 卢宝平 ¹ ; 刘青 ¹ ; 包利霞 ¹ ; 顾天越 ¹ ; 金天明 ² ;

作者机构： 1.大津农学院动物科学与动物医学学院

2.天津市农业科学院

关键词： BVDV;表位预测;E0基因;E2基因

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2022 年 54 卷 010 期

页码： 102-110

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在构建牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)多表位基因与BVDV结构蛋白E0、E2基因的表达载体并检测其免疫效果.从NCBI上获得BVDV的4种具有免疫原性的结构蛋白C、E0、E2、NS3基因序列,利用生物学方法预测其B、T细胞表位;将获得的序列进行连接,重组获得新肽段(命名为AKK),通过生物学在线软件分析AKK序列的二级结构、亲水性、抗原性、三级结构;PCR分别扩增上述基因序列,构建重组表达载体GV658-AKK-E0-E2、GV658-AKK、GV658-E0、GV658-E2,并将上述构建成功的无内毒素重组质粒转染至MDBK细胞,通过蛋白免疫印迹.经PCR扩增获得2 910、1 170、951和729 bp大小的目的条带,与预计相符;经蛋白免疫印迹验证,在34和68 kDa处有AKK蛋白及E0-E2蛋白的融合表达;经流式细胞术验证显示,在CD3+、CD4+细胞占比上,共表达组极显著高于PBS组,显著高于E0组,与ELISA检测IgG抗体水平结果一致.研究表明,试验成功设计了 BVDV多表位序列AKK,并成功构建真核表达载体,AKK、E0、E2蛋白高效表达,共表达组能更好地刺激机体的体液免疫和细胞免疫应答.