文献类型： 中文期刊

作者： 陈婷 ¹ ; 何敬文 ¹ ; 赵微 ¹ ; 扈立伟 ¹ ; 任君 ¹ ; 刘青 ¹ ; 顾天越 ¹ ; 包利霞 ¹ ; 金天明 ² ;

作者机构： 1.天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室

2.天津市农业科学院

关键词： 蜂毒肽;c型溶菌酶;抑菌;毕赤酵母;共表达

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2023 年 009 期

页码： 1-5,12,127

收录情况： 北大核心

摘要： 为了表达一种高效低毒的广谱抑菌蛋白，试验通过T2A连接肽连接蜂毒肽（MEL）与斜带石斑鱼c型溶菌酶（Ec-cLYZ）基因，并克隆至pPICZαA质粒上构建重组表达质粒；将鉴定正确的重组表达质粒用限制性内切酶SacⅠ线性化后电转化至毕赤酵母表达菌株GS115感受态细胞中，构建毕赤酵母表达菌株；利用0.5%甲醇诱导表达，收集上清液进行冻干浓缩并纯化，采用Western-blot法检测重组蛋白的表达情况，BCA蛋白浓度测定试剂盒测定重组蛋白浓度，试管二倍稀释法分别检测不同浓度重组蛋白对兔红细胞的溶血活性，牛津杯法评价重组蛋白的抑菌效果。结果表明：成功构建出重组表达质粒pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL、pPICZαA-Ec-cLYZ和pPICZαA-MEL及毕赤酵母表达菌株GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL、GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ和GS115/pPICZαA-MEL;经甲醇诱导，GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL表达出分子质量为16.5,3.4 ku的重组蛋白，GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ表达出分子质量为16.5 ku的重组蛋白，GS115/pPICZαA-MEL表达出分子质量为3.4 ku的重组蛋白；上清液中重组蛋白Ec-cLYZ-MEL、Ec-cLYZ、MEL的浓度分别为35.49,28.73,27.31 mg/L;重组蛋白Ec-cLYZ-MEL、Ec-cLYZ、MEL在浓度为150 mg/L时对兔红细胞的溶血率分别为2.3%、2.9%、79.0%;停乳链球菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL高度敏感，表皮葡萄球菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL中度敏感，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL低度敏感，且重组蛋白Ec-cLYZ-MEL对测试菌株的抑菌效果优于重组蛋白Ec-cLYZ和MEL。说明重组蛋白Ec-cLYZ-MEL对红细胞无溶血活性且具有良好的抑菌活性。