文献类型： 中文期刊

作者： 杜荣起 ¹ ; 李丹若 ¹ ; 何金灵 ¹ ; 龙芯 ¹ ; 赵瑞利 ¹ ; 赵伟 ¹ ; 金天明 ¹ ; 张东超 ¹ ;

作者机构： 1.天津农学院动物科学与动物医学学院/天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室;天津市农业科学院

关键词： 弓形虫;DNA疫苗;ROP5;ROP17;ROP18

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2023 年 021 期

页码： 11-17,25

收录情况： 北大核心

摘要： 为了评价弓形虫棒状体蛋白(ROPs)DNA疫苗对小鼠急性感染弓形虫的免疫保护作用,试验将获取的 ROP5、ROP17 和 ROP18 基因分别与 pVAX1 载体连接,获得重组质粒 pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP17 和pVAX1-ROP18.将重组质粒转染至HEK293A细胞中,利用Western-blot方法检测目的蛋白在真核细胞内的表达情况.将获得的重组质粒等摩尔比混合后通过腿部肌肉注射免疫小鼠作为混合疫苗组,同时设置空载体组及生理盐水组,免疫后检测小鼠血清IgG抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况、细胞因子水平及T淋巴细胞分型,加强免疫后第 14 天对小鼠腹腔接种弓形虫RH株并观察其生存情况.结果表明:重组质粒经 PCR 扩增、测序及双酶切验证,分别在 1 686,1 863,1 701 bp处出现特异性条带,与目的基因大小一致且无碱基增加、缺失和突变情况;重组质粒经Western-blot检测在62,68,63 ku处成功表达;与空载体组、生理盐水组相比,混合疫苗组血清IgG抗体水平、脾淋巴细胞增殖指数、IFN-γ和IL-6 细胞因子、CD4+ T淋巴细胞占比和CD4+/CD8+ 均极显著升高(P<0.01),免疫小鼠攻虫后的生存时间[(18.4±1.4)d]极显著延长(P<0.01).说明构建的弓形虫ROPs DNA疫苗pVAX1-ROP5/ROP17/ROP18 能够刺激小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,并能增强小鼠抵抗弓形虫感染的能力.