文献类型： 中文期刊

作者： 何金灵 ¹ ; 杜荣起 ¹ ; 郑淇月 ¹ ; 宋淇淇 ¹ ; 张东超 ¹ ; 金天明 ¹ ;

作者机构： 1.天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室;天津市农业科学院

关键词： 弓形虫;DNA疫苗;ROP5;ROP9;ROP17

期刊名称： 天津农学院学报

ISSN： 1008-5394

年卷期： 2023 年 30 卷 003 期

页码： 40-46

摘要： 研究旨在构建弓形虫鸡尾酒DNA疫苗并评价其对小鼠的免疫保护效果.研究将编码弓形虫棒状体蛋白ROP5、ROP9 和ROP17 的基因分别构建至真核表达载体pVAX1 上,获得重组真核表达质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP9 和pVAX1-ROP17,将上述质粒进行PCR和双酶切验证,并通过Western blot检测重组质粒在真核细胞中表达.将三种重组质粒按 1∶1∶1 的比例混合后,取100 μg通过腿部肌肉注射免疫小鼠,加强免疫后,检测小鼠血清抗体、脾淋巴细胞增殖及细胞因子水平,并接种弓形虫RH强毒株进行攻毒,评价免疫后小鼠的保护效果.真核表达质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP9和pVAX1-ROP17经PCR和双酶切验证的结果显示:分别在1 686 bp、1 128 bp和1 836 bp处出现特异性目的条带;Western blot检测结果发现,在约为 62、41 和 68 kDa处出现目的条带,分别与预期目的蛋白ROP5、ROP9 和ROP17 的分子量大小相符.与空载体组和生理盐水组小鼠相比,疫苗免疫组小鼠产生的血清中抗体IgG和淋巴细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-6 水平、脾脏淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)均极显著升高(P<0.01),且接种弓形虫RH强毒株后,免疫组小鼠的存活时间(16.1±2.07)比对照组小鼠存活时间(9.2±0.74 或 9.0±0.77)极显著延长(P<0.01).研究结果表明,成功构建的弓形虫鸡尾酒DNA疫苗pAX1-ROP5/ROP9/ROP17 能激发小鼠的体液免疫反应和细胞免疫反应,并增强小鼠对弓形虫感染的抵抗能力.研究结果为弓形虫新型疫苗研制提供借鉴和参考.