文献类型： 中文期刊

作者： 刘淑杰 ¹ ; 陶新 ¹ ; 邓波 ¹ ; 门小明 ¹ ; 徐子伟 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 表皮生长因子;乳酸乳球菌;表达;肠道;损伤修复;结肠炎

期刊名称： 动物营养学报

ISSN： 1006-267X

年卷期： 2021 年 004 期

页码： 2253-2262

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本试验旨在构建表达猪表皮生长因子（pEGF）的重组乳酸乳球菌（L. lactis）,并评价其对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎模型小鼠肠道损伤的修复作用,为将表达pEGF重组L. lactis应用于断奶仔猪肠道保护提供重要的依据。设计含有3个拷贝数的pEGF同向串联基因序列,并进行L. lactis密码子优化,将合成的3pEGF基因片段与表达载体pNZ8148连接,构建表达pEGF的重组L. lactis。选用32只BALB/c小鼠,随机分为4组,每组8只。采用4%的DSS建立小鼠结肠炎模型,各组小鼠具体处理如下:正常对照组,试验第1～12天饮用自来水;DSS模型对照组,试验第1～7天饮用4%的DSS水溶液,第8～12天饮用自来水;L. lactis组,饮水按照DSS模型对照组处理,同时每天口服1×1012CFU L. lactis,连续12 d;重组L. lactis组,饮水按照DSS模型对照组处理,同时口服1×1012CFU表达pEGF的重组L. lactis,连续服12 d。结果显示:1)通过序列鉴定可知,3pEGF基因成功转入L. lactis;Western blot分析表明所表达的pEGF能与特异性抗体相结合,初步证明该重组蛋白具有活性。2)与正常对照组相比,DSS模型对照组小鼠结肠长度显著降低（P<0.05）;与DSS模型对照组相比,重组L. lactis组小鼠结肠长度显著增加（P<0.05）。3)与正常对照组相比,DSS模型对照组小鼠结肠闭锁蛋白（occludin）浓度显著降低（P<0.05）,D-乳酸（D-LAC）浓度显著升高（P<0.05）,二胺氧化酶（DAO）活性极显著升高（P<0.01）;与DSS模型对照组相比,重组L. lactis组小鼠结肠occludin浓度显著升高（P<0.05）,D-LAC浓度显著降低（P<0.05）,DAO活性极显著降低（P<0.01）。4)与正常对照组相比,DSS模型对照组小鼠结肠白细胞介素-10（IL-10）浓度极显著降低（P<0.01）,白细胞介素-4（IL-4）浓度显著降低（P<0.05）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度极显著增加（P<0.01）;与DSS模型对照组相比,重组L. lacits组小鼠结肠IL-10浓度极显著增加（P<0.01）,IL-4浓度显著增加（P<0.05）,TNF-α浓度有降低的趋势。由此可见,本试验成功构建了表达pEGF的重组L. lacits,重组pEGF具有良好生物活性;小鼠口服表达pEGF的重组L. lacits可抑制结肠的缩短,改善结肠结构和通透性,调节细胞因子浓度到达正常水平,这说明表达pEGF的重组L. lacits维护了肠道屏障功能的完整性,对损伤的肠道具有一定修复作用。