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栉孔扇贝精子膜蛋白的提取分离及初步鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 刘丽燕 1 ; 杨爱国 1 ; 王清印 1 ; 周丽青 1 ; 刘志鸿 1 ;

作者机构： 1.农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词： 栉孔扇贝;精子膜蛋白;糖蛋白;脂蛋白

期刊名称： 海洋水产研究

ISSN： 1000-7075

年卷期： 2008 年 29 卷 02 期

页码： 75-83

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过SDS-PAGE电泳,从提取液的倍数、提取时间、Triton X-100的浓度、SDS的有无等4个方面对提取条件进行优化,确定栉孔扇贝精子膜蛋白的最佳提取条件是:将精液150g离心去除精原细胞,0·1mol/L PBS缓冲液清洗两次,0·1mol/L Tris-HCl缓冲液清洗两次,3000g离心10min(4℃)得精子悬液;然后向精子悬液中加入3倍体积含1%Triton X-100和0.1%SDS的膜蛋白提取液中冰浴振摇1·5h;4℃,50000g离心15min,收集上清精子膜蛋白溶液。SDS-PAGE电泳后,考马斯亮蓝R-250染色检测出22种膜蛋白,分子量在23~156kDa之间,PAS染色检测出糖蛋白有13种,苏丹黑B染色检测出脂蛋白有12种,其中既为糖蛋白又为脂蛋白的有8种。此研究结果可为以后进一步分离纯化栉孔扇贝的精子膜蛋白,研究其在精子发生和受精过程中的功能及作用提供基础资料。

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