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棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和Western鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 李波 1 ; 倪志勇 1 ; 李晓东 1 ; 范玲 1 ;

作者机构： 1.新疆农业科学院核技术生物技术研究所

关键词： GhCOMT1;原核表达;蛋白纯化;Western blotting

期刊名称： 西北植物学报

ISSN： 1000-4025

年卷期： 2012 年 32 卷 10 期

页码： 1971-1976

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.2mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱(His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达,其中16℃诱导12h的蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测目的蛋白相对分子量约为39.748kD;Western blotting分析表明,目的蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应。

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