文献类型： 中文期刊

作者： 潘晓燕 ¹ ; 于永生 ¹ ; 刘晓辉 ¹ ; 王正朝 ² ; 王晓阳 ¹ ; 朴庆林 ¹ ; 张立春 ¹ ; 金海国 ¹ ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院畜牧科学分院

2.弗吉尼亚联邦大学医学院

关键词： 绒山羊;毛角蛋白Ⅱ型中间丝基因;胎儿成纤维细胞;转基因;体细胞核移植

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2012 年 45 卷 10 期

页码： 2067-2075

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】利用体细胞核移植技术制备转毛角蛋白Ⅱ型中间丝K2.9基因的高绒质绒山羊胚胎,为绒山羊优良品种的培育提供一种全新的技术材料。【方法】以含有Neor基因标记的K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得转K2.9基因细胞,将获得的转基因阳性细胞与体外成熟的绒山羊卵母细胞进行核移植,并对生产的重构胚进行了体外培养。本文分别进行了激活方法、供体细胞和卵母细胞来源的筛选,且对获得的囊胚进行了PCR鉴定。【结果】(1)Iono+6-D对成年羊卵母细胞的孤雌激活效果好于A23187+6-D,显著提高了胚胎的卵裂率。(2)羔羊孤雌胚的卵裂率显著低于成年羊,但囊胚率差异不显著。(3)来自2只绒山羊胎儿的转基因成纤维细胞对核移植胚的发育没有显著影响,但2号羊的转基因细胞显著提高了融合率。(4)以羔羊卵进行核移植,显著降低了核移植胚的发育率。(5)对获得的囊胚进行PCR鉴定,成功扩增到目的基因。【结论】将K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染的绒山羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞,核移植到成年羊卵母细胞中,以Iono+6-D进行激活,首次成功、高效地获得携带K2.9基因的绒山羊囊胚。