文献类型： 中文期刊

作者： 刘帅 ; 王荻 ¹ ; 卢彤岩 ¹ ; 曹永生 ¹ ; 杨晨 ² ; 朱国建 ² ; 李绍戊 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

2.新疆额尔齐斯河流域开发工程建设管理局

关键词： 虹鳟;杀鲑气单胞菌;vapA基因;实时荧光定量PCR

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2017 年 41 卷 12 期

页码： 1928-1935

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为实现杀鲑气单胞菌早期快速准确定量检测,研究旨在建立杀鲑气单胞菌的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法。根据GenBank中杀鲑气单胞菌毒力阵列蛋白基因(vapA)保守序列设计并合成一对特异性引物,对其特异性、灵敏度、可重复性和应用性进行评价。结果显示,研究设计的引物具有良好的种间特异性,仅对杀鲑气单胞菌及其亚种有阳性扩增,与其他细菌不发生交叉反应。构建的Real-time PCR标准曲线质粒拷贝数与循环阈值呈良好的线性关系,扩增所得标准曲线分别为y=–4.8345x+42.535,相关系数R~2为0.998,最低检测限为34拷贝/μL,较常规PCR的灵敏度高出约1000倍。应用建立的方法检测人工感染的虹鳟病样,15个被检样品呈阳性反应,与细菌常规鉴定方法结果一致。研究表明,所建立的基于实时荧光定量PCR技术的杀鲑气单胞菌检测方法快速、特异、灵敏,可用于临床诊断和疫病监测。