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利用ZFN敲除转基因猪细胞中多拷贝EGFP基因

文献类型： 中文期刊

作者： 任广彩 1 ; 张英 1 ; 丛佩清 2 ; 陈瑶生 1 ; 何祖勇 1 ;

作者机构： 1.中山大学生命科学学院

2.中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室广东省农业科学院动物科学研究所畜禽育种国家重点实验室

关键词： 锌指核酸酶;外源基因;增强型绿色荧光蛋白;转基因猪;敲除效率

期刊名称： 中国生物化学与分子生物学报

ISSN： 1007-7626

年卷期： 2014 年 30 卷 08 期

页码： 837-842

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂(double-strand break,DSB).通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~104倍.目前,利用ZFN对动物内源基因进行敲除的研究较多,但对转基因动物中外源多拷贝基因进行敲除的报道较少.本研究首先利用荧光定量PCR法对本实验室培育的两头转基因猪中增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的拷贝数进行鉴定,发现其拷贝数分别为11.95和17.36拷贝;然后将靶向EGFP的一对ZFN转染进拷贝数为17.36的EGFP转基因猪的成纤维细胞中,并通过流式和CEL-1酶切方法检测敲除效率.结果表明,转染400 ng、800 ng和1 200 ng ZFN的切割效率分别为0.97%、1.39%和1.76%,可见随着转染ZFN剂量的增加,ZFN的切割效率逐渐提高.但是,不发绿色荧光的细胞比例却没有明显提高,因此认为,ZFN敲除转基因动物中多拷贝基因的效率还是比较低.

  • 相关文献

[1]RNAi技术在转基因猪中的应用研究进展. 邹娴,徐志谦,吴珍芳,李剑豪,蔡更元. 2013

[2]转基因甘蔗红糖DNA的提取及分子鉴定. 王文治,杨本鹏,冯小艳,王俊刚,冯翠莲,熊国如,赵婷婷,沈林波,张树珍,许莉萍. 2019

[3]微注射外源基因对小鼠和家兔受精卵发育的影响. 魏平华,王祖昆,王建忠,邱伦和,雷春,陈清轩,曹颉,宋德秀. 1992

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