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用CRISPR-Cas9在绵羊成纤维细胞ACTG1导入荧光标记基因

文献类型： 中文期刊

作者： 郭延华 1 ; 皮文辉 1 ;

作者机构： 1.绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

关键词： 绵羊;成纤维细胞;ACTG1;CRISPR-Cas9

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN：

年卷期： 2021 年 009 期

页码： 1747-1755

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】在绵羊成纤维细胞中,针对ACTG1基因羧基端,定点导入荧光蛋白标记基因,将外源基因定点导入绵羊基因组中,建立有效的方法。【方法】CRISPR-Cas9系统在绵羊成纤维细胞基因组特定区域引起DNA双链断裂,从而诱导细胞修复断裂的的基因组。通过NHEJ修复途径,在特定位点导入外源基因,改善定点导入效率。【结果】采用CRISPaint通用供体模板,结合CRISPR-Cas9系统,在绵羊成纤维细胞ACTG1基因导入荧光标记效率达1.4%,获得了外源基因定点导入的单克隆细胞株。【结论】CRISPR-Cas9系统结合NHEJ,能够有效的将大的外源DNA序列导入绵羊成纤维细胞的预定基因组位点。

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