文献类型： 中文期刊

作者： 张元鹏 ¹ ; 侯立婷 ¹ ; 杜露平 ¹ ; 于晓明 ¹ ; 李兰 ¹ ; 杨利 ¹ ; 张浩明 ¹ ; 王义伟 ¹ ; 乔绪稳 ¹ ; 程海卫 ¹ ; 秦竹 ¹ ; 陈瑾 ¹ ; 郑其升 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所;江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地;兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心

关键词： CTA1-DD蛋白;枯草芽胞杆菌;表达;黏膜免疫

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 09 期

页码： 42-46

收录情况： 北大核心

摘要： 有研究证实，霍乱毒素(CT)A1亚基与葡萄球菌G蛋白的D肽偶联构建的融合蛋白CTA1-DD具有良好的佐剂效果。为了获得重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的表达，将CTA1-DD基因连接到表达载体pHT43中，构建重组枯草杆菌表达载体pHT43-CTA1-DD。将重组载体转化到枯草芽胞杆菌WB600中，用IPTG诱导重组菌表达，发酵液离心后取上清液，通过SDS-PAGE和Western blot方法分析蛋白表达情况。发酵上清液经Ni-IDA琼脂糖树脂纯化，与流感病毒HA抗原混合后共同滴鼻免疫小鼠后采集小鼠血清和支气管肺泡灌洗液检测IgG和IgA的抗体水平。结果显示：重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中能够分泌表达，在发酵罐中发酵36 h情况下蛋白表达量最高，目的蛋白大小在42 kDa左右，蛋白产量最高能到700μg/mL,Western blot检测目的蛋白正确表达。重组蛋白经过Ni-IDA琼脂亲和层析纯化后与HA抗原混和滴鼻免疫小鼠，ELISA结果显示CTA1-DD蛋白组针对HA抗原能够诱导更高的血清IgG和黏膜IgA抗体水平，说明枯草芽胞杆菌表达的CTA1-DD蛋白具有佐剂活性。试验结果为进一步研究CTA1-DD蛋白在黏膜佐剂的大规模生产应用奠定了基础。