文献类型： 中文期刊
作者： 牛登元 1 ; 王一成 2 ; 袁秀芳 2 ; 徐丽华 2 ; 刘邓 3 ; 伏小平 1 ;
作者机构： 1.甘肃农业大学
2.浙江省农业科学院
3.新疆农业大学
关键词： 猪的生殖与呼吸系统综合征;ORF5;原核表达
期刊名称： 浙江农业学报
ISSN： 1004-1524
年卷期： 2009 年 21 卷 02 期
页码： 126-129
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据GenBank中公布的PRRSV基因序列(EU709837),设计一对PCR引物,以浙江分离株为模板,通过RT-PCR扩增出ORF5基因全序列。以PCR技术构建了缺失信号肽及三处跨膜区的重组ORF5基因,命名为g-ORF5。将g-ORF5基因定向克隆到原核表达载体pET-28a中,转化入E.coli菌株BL21。经酶切和测序鉴定后,阳性菌株用1 mol/L IPTG诱导表达,用Ni-NTA纯化表达的重组蛋白。结果表明,重组GP5蛋白在大肠杆菌中获得表达。纯化后经ELISA和Dot-ELISA分析,表达蛋白具有免疫反应性,能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。
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