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猪伪狂犬病毒gB蛋白间接化学发光抗体检测方法的建立

文献类型: 中文期刊

作者: 向国庆 1 ; 宋帅 1 ; 温肖会 1 ; 吕殿红 1 ; 陈玉婷 1 ; 连聪 1 ; 贾春玲 1 ; 顾有方 2 ; 罗胜军 1 ;

作者机构: 1.广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站

2.安徽科技学院动物科学学院/动物营养调控与健康安徽省重点实验室

关键词: 猪伪狂犬病毒;重组gB蛋白;化学发光;抗体;免疫分析;标准曲线;ROC曲线

期刊名称: 中国农学通报

ISSN: 1000-6850

年卷期: 2024 年 40 卷 036 期

页码: 156-164

收录情况: CSCD

摘要: 研究旨在建立一种快速检测猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB蛋白间接CLIA抗体检测方法,以期为猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)的防控和规模化猪群疫苗免疫水平评估提供技术支持。本研究将羧基磁珠与重组gB蛋白进行偶联反应形成免疫磁珠,利用全自动化学发光仪对各项反应条件进行优化;选用6种不同浓度的标准品绘制标准曲线;通过绘制ROC曲线确定阴阳性判定标准;初步完成方法建立后分别对其特异性、敏感度、重复性、符合率进行评估。结果显示磁珠偶联最佳pH 6.0,蛋白偶联最佳浓度为40μg/mL,10%BSA为最优封闭剂,酶标抗体最佳稀释度为1:20000,血清反应时间为5 min,酶标抗体反应时间为10 min,预激发液反应时间为5 min,最终绘制出一条R2=0.9987的标准曲线,同时将判定标准定为:≥16.78 U为阳性,<16.78 U则为阴性。方法学评估中与7种猪类病原的阳性血清均无交叉反应,敏感度略高于商业化试剂盒,批内批间系数均小于10%,与商业化ELISA试剂盒比对总符合率为98.9%。本研究建立的猪伪狂犬病毒g B蛋白间接化学发光抗体检测方法可用于PR流行病学调查及疫苗免疫水平评估,为后续试剂盒研发提供理论参考。

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