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辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 吴育鹏 1 ; 王健华 1 ; 冯团诚 1 ; 张雨良 1 ; 王小明 1 ; 刘志昕 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 辣椒;辣椒脉斑驳病毒;外壳蛋白;原核表达;抗血清

期刊名称： 园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2010 年 37 卷 10 期

页码： 1598-1604

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR方法克隆了辣椒脉斑驳病毒文昌分离物(ChiVMV-WC)的CP基因,并将其连接到原核表达载体pET-30b(+)上,克隆测序以确定其阅读编码框的正确性,然后将获得的重组质粒pET30b-ChiVMVCP转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,获得的融合蛋白分子量约为38kD。用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化的融合蛋白免疫兔子并获得抗血清。Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的ChiVMV-WC编码CP蛋白发生特异性反应。间接酶联免疫吸附法(ID-ELISA)检测抗血清效价为1/106。通过对田间20个样品的ID-ELISA检测,证实了所制备的抗血清与ChiVMV病叶具有良好的反应特异性。

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