文献类型： 中文期刊

作者： 熊年年 ¹ ; 陶洁 ² ; 张清真 ² ; 张春玲 ² ; 李本强 ² ; 常宏赏 ² ; 刘惠莉 ² ;

作者机构： 1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所

2.上海市农业科学院畜牧兽医研究所;上海海洋大学水产与生命学院;上海市农业遗传育种重点实验室

关键词： 猪病毒性腹泻病原;多重PCR检测技术;PEDV;TGEV;Po RV;BVDV

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2016 年 08 期

页码： 972-978

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 分别以猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因、猪轮状病毒(Po RV)VP6基因、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因、猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Npro基因为靶基因,参照Gen Bank上登录的基因序列,利用DNAStar和Oligo7软件设计了4对引物。采用PCR分别扩增各病毒基因,并克隆至p MD18-T载体,获得4个阳性重组质粒。以重组质粒为模板,进行多重PCR方法的优化。特异性试验检测可分别扩增出相应的病毒基因片段;敏感性试验结果显示,检测PEDV、TGEV、Po RV及BVDV质粒的最低拷贝数分别为730copies/L、547 copies/L、6.47×103copies/L、705 copies/L。应用该方法对猪场44份猪腹泻样品进行检测,结果检出15份PEDV样品,3份TGEV样品,2份BVDV样品,其中PEDV与TGEV混合感染样品2份,TGEV与BVDV混合感染样品1份。随机抽取其中2份PEDV阳性样品进行病毒分离,病毒经细胞传3代以上PCR检测均为阳性,对PCR产物测序证实为PEDV。结果表明,本研究建立的多重PCR方法具有快速、简便、特异性强、敏感度高的特点,能够对PEDV、Po RV、TGEV和BVDV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。