文献类型： 中文期刊
作者： 黄雨晴 1 ; 华涛 2 ; 唐波 2 ; 常晨 2 ; 刘国阳 2 ; 张雪花 2 ; 卢宇 2 ; 侯继波 2 ; 张道华 2 ; 许家荣 1 ;
作者机构： 1.南京农业大学动物医学院
2.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所
关键词： 伪狂犬病病毒;gB基因;原核表达;IgA;间接ELISA
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2019 年 011 期
页码： 1346-1353
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了建立检测猪伪狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫时特异的IgA抗体的间接ELISA方法,本研究采用PCR方法扩增了PRV gB基因截短片段,并将其连入原核表达质粒pGEX-6P-1,构建的表达质粒转化至大肠杆菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG进行诱导表达,得到gB重组蛋白的可溶性表达,并用谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化.以纯化的gB重组蛋白作为包被抗原,以山羊抗猪IgA-HRP为二抗,建立了猪伪狂犬病病毒IgA的间接ELISA检测方法.经ELISA反应条件优化,确定抗原包被浓度为2.4μg/mL,封闭液为10 g/L明胶,一抗37℃孵育1.5 h,二抗1∶20 000稀释后37℃孵育0.5 h,TMB显色液显色10 min.该方法的批内和批间变异系数均小于10%,重复性较好.利用该间接ELISA方法对PRV黏膜免疫的仔猪进行检测,结果可以在鼻腔黏液中检测出特异的IgA抗体.本试验为PRV黏膜免疫提供了初步检测方法.
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