文献类型： 中文期刊

作者： 郑树城 ¹ ; 李莹莹 ² ; 王庆 ² ; 曾伟伟 ² ; 王英英 ² ; 任燕 ² ; 石存斌 ³ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院

2.;中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院

3.;中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院;

关键词： 鲤疱疹病毒3型;锦鲤疱疹病毒;ORF136;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 204-210

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)ORF136基因编码蛋白进行功能研究和血清学诊断,本实验通过对ORF136基因推导的第31~157位氨基酸序列进行PCR扩增,并与原核载体pET-32a(+)连接,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态后进行IPTG诱导表达,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus)以制备ORF136多克隆抗体,运用Western blot和间接免疫荧光技术对抗体进行鉴定。结果表明,重组融合表达蛋白大小与预期一致,约为35 kD,且主要分布在包涵体中。Western blot分析显示,免疫兔后获得的纯化ORF136多克隆抗体能特异性识别纯化的CyHV-3和感染CyHV-3的KS细胞;间接免疫荧光分析进一步表明ORF136多抗能识别感染CyHV-3的KS细胞。ORF136多克隆抗体的制备为ORF136蛋白功能研究和CyHV-3血清学诊断方法的建立提供了重要基础。