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牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 韩猛立 1 ; 何延华 1 ; 黄新 1 ; 宋天增 1 ; 薄新文 1 ; 钟发刚 1 ;

作者机构： 1.新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室;石河子大学动物科技学院

关键词： SYBR GreenⅠ;实时荧光定量聚合酶链反应;牛;CD80;CD86

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2010 年 40 卷 09 期

页码： 953-958

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank中牛CD80和CD86基因的序列,在保守区设计并合成各自的特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立一种检测牛共刺激分子CD80和CD86的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。将CD80基因和CD86基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明,CD80基因、CD86基因和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×108 copies/μL范围均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。证实,所建立的牛共刺激分子CD80和CD86荧光定量RT-PCR检测方法适用于临床样品的检测。

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