文献类型： 中文期刊

作者： 徐彬 ¹ ; 张敬峰 ¹ ; 卢凤英 ¹ ; 孙华伟 ¹ ; 赵莎 ¹ ; 张晓曦 ¹ ; 刘青涛 ¹ ; 张小飞 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽医生物工程技术重点实验室

关键词： 滑液支原体;特有基因;qPCR;检测方法

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 2694-6114

年卷期： 2021 年 49 卷 019 期

页码： 183-189

收录情况： 北大核心

摘要： 利用CD-HIT-EST快速聚类分析和BLASTN同源性比对共鉴定出17个滑液支原体(Mycoplasma synoviae)特有基因,并从中选取保守基因VY93_RS02885作为分子诊断的靶标基因.根据该基因核苷酸序列设计了1对引物,建立了滑液支原体的SYBR green qPCR检测方法.结果表明,该方法对不同浓度的模板和对应的CT值具有较好的线性关系,R2值为0.9988;该方法的特异性较好,BLASTN比对,检测引物对仅能匹配滑液支原体的特有基因VY93_RS02885,结果显示,该方法能特异性地检测滑液支原体,与其他常见的引起禽关节炎的细菌/支原体性病原无交叉反应;该方法的敏感性较好,100%阳性检测的靶标基因最小拷贝数为10;该方法的重复性较好,对3个不同浓度的模板进行组间和组内重复检测,变异系数≤1.1727%.此外,该方法对临床样品的检出率与传统检测方法相符.因此,本研究建立的针对滑液支原体特有基因的SYBR green qPCR检测方法具有用时短、特异性高、准确性高、敏感性高、可重复性强的优点,可为滑液支原体的快速诊断和流行病学调查提供技术手段.