文献类型： 中文期刊

作者： 刘媛 ¹ ; HuovinenTuomas ² ; 刘贤金 ¹ ; 粱颖 ¹ ; 张存政 ¹ ; 谢雅晶 ¹ ; 贺江 ¹ ; 王耘 ¹ ; 张霄 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所

2.芬兰图尔库大学生物系

关键词： 微囊藻毒素LR;单链抗体;时间分辨免疫分析;磁珠

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2012 年 45 卷 02 期

页码： 330-337

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】从鼠源合成噬菌体抗体库中,快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体。【方法】采用磁珠筛选和负筛选方法,设计两轮微囊藻毒素LR单链抗体的筛选方案。用噬菌体产出投入比和多克隆噬菌体免疫分析,对每轮筛选后微囊藻毒素LR特异性噬菌体的富集效果进行鉴定。再将第2轮筛选获得的次级库提取单链抗体基因,转入可溶性表达载体;诱导表达后,采用时间分辨荧光免疫法,对单个噬菌体克隆鉴定并测序。【结果】两轮筛选的噬菌体产出投入比分别为4.8×10-8和2.88×10-6。第2轮筛选后的次级库,经多克隆噬菌体免疫分析得到的荧光信噪比,比原始抗体库提高了22.8倍。最终鉴定得到5株不同的阳性噬菌体克隆,其中最佳的克隆对微囊藻毒素LR的检测灵敏度(IC10)为13 ng.mL-1,抑制中浓度(IC50)为435 ng.mL-1,线性范围在31—5 952 ng.mL-1。【结论】本研究筛选到的单链抗体,有潜力应用于微囊藻毒素LR的免疫学检测或免疫亲和柱的制备,同时也探索了一种高效的微囊藻毒素LR单链抗体的库筛选、鉴定方法。