文献类型： 中文期刊
作者： 李婵娟 1 ; 石慧 2 ; 王曼玥 2 ; 王婧 3 ;
作者机构： 1.武汉设计工程学院食品与生物科技学院;湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
2.;武汉设计工程学院食品与生物科技学院;湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
3.;武汉设计工程学院食品与生物科技学院;湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所;
关键词： 木聚糖酶;XynAH297F;定点突变;酶学性质
期刊名称： 食品与发酵工业
ISSN： 0253-990X
年卷期： 2018 年 03 期
页码： 41-46
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 利用重叠延伸PCR技术对嗜热脂肪芽孢杆菌木聚糖酶XynA活性中心附近的H297位点突变为F。将XynA及XynA_(H297)F在大肠杆菌BL21(DE3)中实施了表达、纯化以及酶学性质研究。比较研究野生型木聚糖酶XynA和突变体XynA_(H297)P的酶学性质发现,突变前后木聚糖酶的最适反应pH值均为5.5,在pH 4~10的缓冲液中处理20 h后残余酶活均在90%以上,均具有较好的pH稳定性。XynA最适反应温度为70℃,80℃处理20min后只有10%的残余酶活;XynA_(H297)最适反应温度为75℃,且相同处理条件下XynA_(H297)仍具有30%左右的残余活性,说明突变体的热稳定性有一定程度提高。与XynA相比,XynA_(H297)F的动力学参数Km、Vmax和Kcat均增大,说明突变后酶对底物的亲和力降低,但催化速率有所提高。
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