文献类型： 中文期刊

作者： 魏天 ¹ ; 王成宇 ¹ ; 王凤杰 ² ; 张守峰 ² ; 扈荣良 ² ; 张芳毓 ¹ ; 吕礼良 ¹ ; 王永志 ¹ ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院

2.中国农业科学院长春兽医研究所

关键词： 非洲猪瘟病毒;MGF360-13L蛋白;原核表达;蛋白纯化;蛋白质印迹

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医(下半月)

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2022 年 005 期

页码： 82-85

收录情况： 北大核心

摘要： 为了获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)体外诱导表达的MGF360-13L蛋白,试验依据GenBank中报道的MGF360-13L基因序列设计引物,引入His标签,以ASFV全序列为模板扩增目的片段.将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中进行体外诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-P AGE)分析蛋白质的表达情况,将表达的重组蛋白通过镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化,蛋白质印迹(Western-blot)分析蛋白质的活性.结果表明:克隆得到的MGF360-13L基因片段长度为1 060 bp,获得的重组蛋白在沉淀中以包涵体的形式表达,分子质量约为60 ku,纯化后可获得纯度较高的MGF360-13L,用BCA法测定最高浓度为2.73 mg/mL.Western-blot检测结果显示在60 ku处有一条明显的特异性条带说明MGF360-13L蛋白可以在BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中表达并纯化,纯化后可获得纯度较高的MGF360-13L,且具有良好的反应原性.