文献类型： 中文期刊
作者： 张慧 1 ; 赵文娟 1 ; 韩猛立 1 ; 王新华 2 ; 薄新文 2 ;
作者机构： 1.石河子大学动物科技学院
2.新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室
关键词： 扩展莫尼茨绦虫;cDNA文库;SMART
期刊名称： 中国畜牧兽医
ISSN： 1671-7236
年卷期： 2009 年 36 卷 07 期
页码： 52-56
收录情况： 北大核心
摘要： 利用SMART(switching mechanismat 5′end of RNA transcript)技术,采用Clontech公司的SMARTTMcDNALi-brary Construction Kit构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库。用Trizol Reagent提取总RNA,用Oligotex mRNA Kits分离mRNA,以逆转录酶PowerScriptTM合成第一链cDNA,通过LD-PCR合成并扩增双链cDNA;扩增产物经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、过SPIN-400TM柱去除小片段,连接到SfiⅠ消化过的pBluescriptⅡSK*质粒载体中,最后将重组质粒转化到E.coliDH5α内得到原始文库,扩增后,将文库保存于96孔细胞培养板中。经测定,构建的cDNA文库滴度为2.52×105PFU/mL;重组率为94.7%,插入片段长度多在0.5～3kb之间,平均长度约1.2kb。经5′端测序获得2642条有效序列,归并为1081条unigene。结果表明成功构建了扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库,获得了较丰富的扩展莫尼茨绦虫成虫表达基因,为筛选扩展莫尼茨绦虫的功能基因全长序列奠定了基础。
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