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猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的真核表达质粒的构建及表达分析

文献类型: 中文期刊

作者: 赵光辉 1 ; 鲁琨 1 ; 张改平 2 ; 宁长申 1 ; 王选年 2 ; 张龙现 1 ; 菅复春 1 ; 宋海涛 1 ;

作者机构: 1.河南农业大学牧医工程学院

2.河南省农业科学院河南省动物免疫重点实验室

关键词: 猪囊尾蚴;排泄分泌抗原;基因表达

期刊名称: 河南农业大学学报

ISSN: 1000-2340

年卷期: 2009 年 43 卷 02 期

页码: 168-172

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 根据GenBank中的参考序列设计并合成引物序列,从pMDM13h中扩增带酶切位点和His-tag的基因序列;用HindⅢ和XhoⅠ双酶切PCR扩增产物和pcDNA3.0载体,连接构建真核表达重组质粒pc3M13h,利用PCR,双酶切和测序鉴定其正确性;重组质粒pc3M13h转染COS-7细胞,瞬时表达的转染细胞(96孔板)在转染36~48 h后,应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学,分别检测pc3M13h在COS-7细胞培养上清液和细胞内的表达.结果表明,设计合成的引物成功扩增了带有酶切位点和H is-tag的基因序列;成功构建了真核表达重组质粒pc3M13,双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学检测显示,pc3M13h重组质粒不但能够在COS-7细胞中进行表达,而且能够进行微量的分泌表达.

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