文献类型： 中文期刊
作者： 张悦 1 ; 徐福洲 2 ; 陈小玲 2 ; 苏霞 2 ; 王家鑫 2 ; 杨兵 2 ;
作者机构： 1.河北农业大学生命科学学院
2.河北农业大学生命科学学院;北京市农林科学院畜牧兽医研究所
关键词： 禽白血病病毒;亚群;基因芯片;多重PCR
期刊名称： 中国动物检疫
ISSN： 1005-944X
年卷期： 2012 年 06 期
页码： 37-42
摘要： 目的基于多重PCR技术,建立禽白血病病毒(ALV)的B、E、J亚群的基因芯片分型和检测方法。方法根据NCBI已收录的ALV三个亚群的参考毒株cDNA序列,在各亚群特异性基因突变区两端选取其保守区域,设计合成三个亚群的通用上游引物1条,以及B、E亚群的通用下游引物和J亚群下游引物各1条,将上述引物用Cy3标记,建立多重PCR体系;参考靶序列内部的三个亚群各自的保守区域,选择亚群之间基因突变位点多的区域,设计合成5条寡核苷酸探针,制作寡核苷酸探针基因检测芯片;以寄主细胞DF-1中提取传代ALV的cDNA,以及合成NCBI收录的各亚群参考毒株的cDNA序列作为检测模板;利用Cy3标记的PCR扩增产物,与基因芯片进行杂交反应,扫描结果。结果芯片准确检测并分型三个亚群的参考毒株,其检测灵敏度能够达到102个基因拷贝,且与禽类常见的四种病毒均无交叉反应。结论本研究结果证明,基因芯片技术是一种ALV的B、E和J亚群进行检测和分型的有效方法,且具有较高的特异性和灵敏度,为今后在临床应用中快速鉴别诊断ALV等免疫抑制病提供可行性。
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