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葡萄ISSR-PCR反应体系的建立与优化

文献类型： 中文期刊

作者： 赖呈纯 1 ; 范丽华 1 ; 谢鸿根 1 ; 余亚白 1 ; 郑铭西 1 ; 谢福鑫 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院农业工程技术研究所

关键词： 葡萄ISSR-PCR;正交设计;单因素试验;反应体系

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2012 年 0 卷 02 期

页码： 159-164

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用正交设计L9(34)对影响葡萄ISSR-PCR反应体系的4个因素(dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA)在3个浓度水平上进行试验,并通过直观分析初步确定其反应体系;在此基础上,通过单因素试验探讨了dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA、退火温度及循环次数等因素或条件对葡萄ISSR-PCR扩增结果的影响,确定最佳反应水平。最终建立了葡萄ISSR-PCR扩增的最佳反应体系:在25μL的反应体系中,dNTP浓度0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量0.5 U,引物浓度0.4mmol/L,DNA模板用量40 ng。反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min 30 s,40次循环;最后72℃延伸10 min,10℃保存。

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