文献类型： 中文期刊

作者： 黎明国 ¹ ; 李清春 ¹ ; 陈鑫 ¹ ; 卢世豪 ¹ ; 何凡 ¹ ; 祁梦凡 ¹ ; 张化鹏 ¹ ; 任玉军 ¹ ; 张庆泽 ¹ ; 符彬彬 ¹ ; 徐梦思 ¹ ; 艾子凯 ¹ ; 闫坤 ¹ ; 冯赟 ¹ ; 华再东 ² ; 黄涛 ¹ ; 毕延震 ² ;

作者机构： 1.石河子大学动物科技学院

2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室

关键词： 猪卵母细胞;TET去甲基化酶;甲基化;纺锤体;活性氧;线粒体膜电位

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 005 期

页码： 1907-1917

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】研究TET（ten-eleven translocation）去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响。【方法】将收集的猪卵丘-卵母细胞复合体（COCs）置于不同浓度（0（对照组）、100、200和400μmol/L）Bobcat339抑制剂的体外成熟培养液中培养42 h,测量卵丘扩展直径，统计成熟率，确定最小有效浓度。在体外成熟培养液中培养27 h后，利用免疫荧光（IF）检测5-甲基胞嘧啶（5mC）与5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）信号强度以及纺锤体组装情况；利用DCFH-DA染料检测卵母细胞活性氧（ROS）水平；利用JC-1染色法检测线粒体膜电位水平（MMP）;利用ATP检测试剂检测卵母细胞ATP水平；利用实时荧光定量PCR检测42 h时COCs卵丘扩展相关基因表达水平和27 h时卵母细胞抗氧化相关基因表达水平。【结果】与对照组相比，100、200和400μmol/L组卵丘细胞扩展水平均极显著降低（P＜0.01）,100、200和400μmol/L组成熟率显著或极显著降低（P＜0.05;P＜0.01）,确定最小有效浓度为100μmol/L,后续试验均用该浓度。IF检测结果显示，与对照组相比，27 h时100μmol/L组卵母细胞中5mC信号强度显著升高（P＜0.05）,而5hmC信号强度没有显著降低（P＞0.05）。与对照组相比，27 h时100μmol/L组卵母细胞纺锤体排列紊乱，组装异常。与对照组相比，ROS水平极显著升高（P＜0.01）,MMP和ATP水平极显著降低（P＜0.01）。与对照组相比，42 h时100μmol/L组COCs中卵丘扩展相关基因透明质酸合成酶2（Has2）表达水平显著降低（P＜0.05）,穿透素3（Ptx3）基因表达量极显著降低（P＜0.01）,27 h时100μmol/L组卵母细胞中抗氧化相关基因超氧化物歧化酶1（Sod1）与Sod2表达水平显著降低（P＜0.05）。【结论】TET去甲基化酶通过清除猪卵母细胞中的5mC,降低ROS水平，提高MMP水平来指导纺锤体正常组装排列，维持COCs的正常扩展，保证猪卵母细胞正常成熟。