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黄鳝雌激素受体α基因的克隆、抗体制备及初步分析

文献类型： 中文期刊

作者： 丁炜东 1 ; 曹丽萍 1 ; 曹哲明 1 ; 邴旭文 1 ; 陈克春 2 ; 胡晋鸣 3 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心/农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室

2.姜堰市水产技术指导站

3.泰州市日盛生态农业发展有限公司

关键词： 黄鳝;雌激素受体;原核表达;抗血清;免疫组化分析

期刊名称： 华中农业大学学报

ISSN： 1000-2421

年卷期： 2014 年 33 卷 04 期

页码： 105-111

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 对雌激素受体α基因的氨基酸序列进行抗原性分析,筛选合适的基因片段进行克隆,经RT-PCR扩增得到大小为945bp的片段,经测序鉴定后,将该片段定向亚克隆于pMAL-c2x表达载体中,转化至TB1感受态细胞中进行诱导表达。经1mmol/L IPTG诱导4h观察到有新的重组蛋白获得了表达,采用SDS-PAGE和Western blot试验进行检测,结果表明表达的重组蛋白的分子质量约为78.1ku,表达产物占菌体总蛋白的42.3%,且具有免疫学活性。进一步纯化和蛋白酶切后,得到单一的雌激素受体α蛋白。以该蛋白免疫小鼠制备抗体,在免疫第7周时达到最大滴度1.158±0.232。将制备的多克隆抗体进行黄鳝性腺免疫组化分析,结果表明其能特异性地与卵巢中的激素受体α反应,在细胞膜上形成褐色沉淀。

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